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新聞資訊 技術文章 化妝品光毒性試驗方法分析:以防曬劑光刺激性雞胚試驗評估為例
化妝品光毒性試驗方法分析:以防曬劑光刺激性雞胚試驗評估為例
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  • 2024-12-20

  化妝品光毒性實試驗是指用于評估化妝品原料或成品在接觸皮膚后,經過紫外線照射可能引發的皮膚毒性反應的一系列實驗方法。這些實驗的目的是為了預測和評估化妝品成分是否具有潛在的光毒性,以確保產品的安全性。光刺激性即狹義的光毒性,是光反應物通過敏化光氧化破壞細胞膜脂質和蛋白而造成的非免疫性組織損傷。在臨床上,光刺激反應會使皮膚產生瘙癢、紅斑、丘疹,并常常伴有色素沉著現象。因此,光毒性是安全應用超細二氧化鈦防曬劑的重點關注問題之一。




  作為第三方檢測中心,中科測試機構擁有CMA和CNAS認證檢測資質,檢測設備齊全,數據科學可靠,可出具國家認可的化妝品光毒性試驗報告。


  3T3中性紅攝取光毒性試驗


  隨著歐盟2013年全面禁止化妝品動物試驗,基于體外模型的動物替代方法已成大勢所趨。目前,唯一通過驗證的光毒性體外評價方法是3T3中性紅攝取光毒性試驗(OECD 432),該方法也于2016年被增補入我國的《化妝品安全技術規范》(2015年版)。


  作為一項細胞試驗,其局限性在于:1)受試物在培養基中的溶解度不適用于部分非水溶性的超細二氧化鈦顆粒;2)具有高比表面積的納米顆粒容易在細胞表面聚集或與中性紅染料結合,影響細胞活率的測定;3)無法分析毒性作用機制;4)方法本身存在一定的假陽性概率。


  此外,超細二氧化鈦的光安全性還受不同理化性質(如粒徑、晶型和表面處理)的影響。有研究表明,超細二氧化鈦的光反應性和ROS光氧化性在很大程度上取決于其粒徑、形狀和晶體結構。較小粒度、銳鈦礦和非晶形式的超細二氧化鈦-般被認為比較大粒度和金紅石型的二氧化鈦顆粒具有較高的光氧化性和光毒性。


  為了降低化妝品用的二氧化鈦的ROS效應,工業上通常通過涂覆二氧化硅或其他金屬氧化物來降低光氧化性并增強分散性。然而,各種涂覆的超細二氧化鈦顆粒的光毒性尚未得到充分研究,而缺乏適合的評價方法是制約其相關研發的重要原因。


  雞胚絨毛尿囊膜試驗


  雞胚絨毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)是高度血管化的胚胎外膜,從胚胎發育的第3天開始生長,在第7天血管就可完全覆蓋蛋殼內層,第13天就能完全分化。由于生長迅速和材料容易獲得,CAM被廣泛應用于化妝品原料和配方產品的血管、胚胎發育相關毒性研究和功效評價領域。


  德國人Neumann于1997年建立了光雞胚試驗(photohen'segg test:PHET),利用4d受精雞胚發育的卵黃膜蜘蛛血管對光照敏感,通過觀察雞胚死亡、膜變色和出血三個指標,驗證了該模型對光毒性陽性物質血卟啉和8-甲氧基補骨脂的敏感性。2005年,Neumann等進步將PHET聯合3T3中性紅攝取光毒性實驗和光豚鼠實驗對13種化學物質的光毒性進行了綜合評估,結果表明PHET可以對不同強弱的光毒性物質進行準確的排序,且不受溶解度的影響,還可能對不同藥品的光毒性機制進行初步探究。


  然而有研究表明,PHET試驗并非為納米材料設計,當應用于超細二氧化鈦樣品的研究時存在死亡率過高、重復性差等缺點。


  因此,需對原PHET方法進行改進,使其適于測試無機納米顆粒具體改變包括:1)用血管發育更成熟的9dCAM取代4d的卵黃膜;2)在出血和膜變色的基礎上,增加凝血(血管里血液不再流動或形成血栓)作為血管反應指標;3)采用光刺激指數的計算,實現對光毒性的定量描述。


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